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qannexin v r-pe 20 tests是bd
公司用於凋亡流式檢
測的試劑盒，
產品顯示種屬為人，
請問能否用於大鼠細胞的
檢測？a
：可以。因為
annexin v
是與ps
親和，而
ps在不同種屬
間應該沒差異。在正常細胞中，磷脂醯絲氨酸(
ps)只分布
在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂醯絲氨酸(
ps)由脂膜內
側翻向外側。
annexin v
是一種分子量為
35~36kd
的ca2+
依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂醯
絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂醯絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。
因此annexin v
被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。
將annexin v
進行螢光素
fitc
標記，以標記了的
annexin v
作為螢光探針，
利用螢光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡
的發生。
q用流式作細胞凋亡為什麼跟
tunel
差別那麼大啊？？
tunel
測出來的細胞凋亡率大概有
30%而作流式測出來的凋亡率只有
2%(陰性對照
0.5%
)差別好大啊，用的是
beckman公司的
annexin v /pi
雙染試劑盒，實驗步驟如下：
)胰酶消化貼壁細胞，加培養基中止，離心
轉5min
)吸去上清，
pbs0.5ml
重懸細胞(因為要送到別處作流式，期間路程約
1h，戶外溫度約度)
)然後加入
annexin v /pi
各微公升，避光
20min
，上機。
請問這是什麼原因導致的？
a：我也用這兩種方法做過凋亡，是存在兩種方法測的凋亡率差別有點大，但還沒有大到你
這樣的程度。雙染測的是凋亡的早期事件
ps外翻。
tunel
測的是凋亡最晚期的事件
dn**段化。而且
tunel
在檢測過程中，把操作損傷細胞和壞死細胞當作了凋亡細胞，而且如
果tunel
是肉眼計數的話，也會有判斷上的誤差，所以，往往
tunel
作出來的凋亡率高
一點。但如果凋亡率達到
30%ladder
估計也應該跑的出來。雙染雖然是機器操作，但在調
試補償時，
人為的影響還是挺明顯的，也不是特別的客觀。基線稍微左移，
你的凋亡率就成
倍上公升。
所以，給你的建議是在經費、
時間允許的範圍內再多做幾次吧。
感覺這麼大的差異，
可能這兩種方法都會存在問題。還有，去流式的路上，裝細胞的
ep管最好插在冰上，拿著
冰盒。q
：可以用液氮儲存瘤組織塊，然後再做流式細胞分析嗎？
a我認為是不能的。
因為流式細胞分析要求細胞分散、
單個，活性好，
這樣才能區分死亡、
凋亡和活性細胞。
組織在凍存、
復溫的過程中會有大量的細胞死亡，
同時經過這一過程的組
織在分離成單個細胞的時候會形成許多細胞碎片，
不宜上流式檢測了，
所以用於流式檢測的
標本最好是新鮮標本，即取材後立即檢測，效果最好。
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