轉殖需要驗證 單轉殖抗體製備 雜交瘤細胞的亞轉殖

2021-10-14 18:00:26 字數 756 閱讀 7343

1. 培養基的配製

第一次亞轉殖,一般用ht完全培養基(含1×ht和20%胎牛血清的1640完全培養基),配製方法:20%胎牛血清+1%雙抗(鏈黴素和青黴素,100×)+1/50體積的ht(50×)+1640不完全培養基。

2. 飼養細胞的準備

(frdbio,mcc0014)。​www.friendbio.com

3. 細胞亞轉殖

教科書和參考資料一般是建議將細胞稀釋到平均每孔0.8個細胞,此時含有單個細胞的孔的概率最高;但是,這個方法並不科學,原因是不同實驗體系對細胞生長的支援並不一樣,並不是每孔單細胞都可以順利存活成長起來,所以,每個實驗室需要根據自己的實驗體系測試最佳的單孔平均細胞個數。

陽性細胞稀釋到平均每孔某個確定的個數,分種到含有飼養細胞的96孔板裡,置於5% co2 37℃細胞培養箱中培養,5天左右觀察,選取只含有單集落細胞孔進行上清檢測;如果單集落孔達到50%以上,且所選擇的單集落孔檢測的結果為100%陽性即可認為此細胞為單轉殖細胞株,以雜交瘤細胞原始孔編號為其命名。將亞轉殖後的細胞株放大,可進行腹水生產。如果檢測結果達不到100%陽性則需要從本次亞轉殖所獲得細胞株中陽性值最高的孔繼續進行第二次亞轉殖。

亞轉殖得到的細胞株需要進行多種實驗條件的驗證,elisa驗證只能算是篩選;常見的實驗驗證條件有免疫印跡(western blot),免疫螢光(if)、免疫組化(ihc)等等,如果要進行下游產品開發還需要進行進一步實驗.

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