從動物血液中提取和純化膽鹼酯酶

2021-10-19 19:04:55 字數 570 閱讀 1558

由於農藥殘留的種類較多,採用金標免疫或其他方案都難以一次性判斷到底有沒有有機磷、氨基甲酸酯類(其實還有有機氯只是國家禁用了該型別農藥)農藥,所以古老的酶抑制法直接仍在使用。然而使用酶抑制法,膽鹼酯酶就是必不可少的試劑了,下面記錄一種從動物血液裡邊提取膽鹼酯酶的方法。還有養蒼蠅從蒼蠅頭部提取的下次再記。 下面的方案**於廣東省微生物研究所  的研究。

(1)將新鮮動物血液於室溫下凝固後,於0~4℃下冷凍2~48小時,取其上清液;

(2)將上一步所得的上清液以2000~15000r.p.m,0~4℃離心,取其上清液,即得乙醯膽鹼酯酶粗提液;

(3)用硫酸銨沉澱法純化乙醯膽鹼酯酶: a、在冰浴中於乙醯膽鹼酯酶粗提液中緩慢攪拌下加入硫酸銨,使酶液中硫酸銨的飽和度在20%~90%的範圍內; b、上述所得溶液於3000-15000r.p.m,0-4℃冷凍離心,保留沉澱; c、加入ph7.5-8.0的磷酸緩衝液溶解沉澱,並用ph7.5-8磷酸緩衝液稀釋2-10倍;

(4)用透析法脫硫酸銨:將上步經過硫酸銨沉澱的酶液裝入透析袋中,用其體積20~30倍的蒸餾水透析,直至透析液不產生沉澱為止;

(5)將上一步所得的酶液濃縮,乾燥,即得已純化的乙醯膽鹼酯酶製品。

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