牛眼晶體上皮細胞培養方法

2021-10-22 06:39:24 字數 775 閱讀 4993

培養方法:

1.市場取牛眼,剪去周圍的結締組織,然後放於1/2000 u慶大液中,30分鐘消毒。

2.超鏡台中,將牛眼取出,d-hanks液清洗3次,剪刀從角鞏膜緣後5mm左右處剪開鞏膜,環形剪開眼球,將角膜、虹膜等眼前節組織去除,暴露晶體。

3.將懸韌帶剪斷,取出晶體,從赤道部靠下一點環形剪開晶體,鑷子取下前囊膜,將囊膜面朝上,放於培養皿中。

4.加入0.25%的胰酶消化,消化過程中可以用吸管輕微吹打,消化時間8-15分鐘左右。然後加入血清培養基中止。

5.直接將消化後的液體加入培養瓶中培養,細胞貼壁,3天後換液,6-7天傳代,然後細胞就可以用於實驗使用。

心得:1.我覺得培養用的牛眼不一定需要胎牛或小牛眼,成年牛眼一樣是可以做出來的,而且細胞的形態和狀態都還不錯,成年牛眼我已經養出好幾次了

2.培養方法問題,以前都是用組織塊培養法,但是我覺得效果並不是很好,而且週期比較長,消化法更容易培養出細胞。

3.有人推薦用胰酶+edta消化,然後離心。個人感覺就用胰酶消化即可,就可以省去離心這一步,減少細胞丟失,可以直接將消化後液體加入培養瓶培養。

4.消化時間非常關鍵,時間長短如果控制不好,將會導致整個實驗的失敗。個人認為時間要自己摸索,和實驗室條件,胰酶的情況有關,個人感覺最好不要超過15分鐘,那樣將會導致細胞漂浮,死亡,不容易貼壁。消化溫度,如果天氣較熱,就在室溫下即可。較冷,可以放在培養箱中孵育。

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