多位點序列分型

2021-08-22 00:16:34 字數 1151 閱讀 8677

多位點序列分型

(multilocus sequence typing,mlst)是一種基於核酸序列測定的

細菌分型方法,通過pcr擴增多個管家基因內部片段,測定其序列,分析菌株的變異,從而進行分型。mlst是由多位點酶電泳(mlee)衍生出來的一種分型方法,由maiden等研究設計,於2023年首先應用於自然變異是的腦膜炎奈色球菌(neisseria meningitides),後來被廣泛應用於其它

病原菌、環境菌和真核生物中。

與傳統分子生物學分型方法相比,mlst具有更高的分辨力,能將同種細菌分為更多的亞型,並確定不同st型之間的系統發育關係以及與疾病的聯絡。mlst操作簡單,結果能快速得到並且便於不同實驗室的比較,已經用於多種細菌的流行病學監測和進化研究。隨著測序速度的加快和成本的降低,以及分析軟體的發展,mlst逐漸成為細菌的常規分型方法。mlst越來越多的被作為能進行國際間菌株比較的常用工具,建立一種更為準確的分型系統方法。mlst目前已經成為了細菌分子流行病學研究的一種重要方法,可通過資料庫與其它國家和地區的研究結果進行比對,從而更加全面的認識本地區細菌流行的特徵。

多位點序列分型的原理:mlst方法一般測定6~10個管家基因內部400~600bp的核苷酸序列,每個位點的序列根據其發現的時間順序賦予乙個等位基因編號,每一株菌的等位基因編號按照指定的順序排列就是它的等位基因譜,也就是這株菌的序列型(sequence type,st)。這樣得到的每個st均代表一組單獨的核苷酸序列資訊。通過比較st可以發現菌株的相關性,即密切相關菌株具有相同的st或僅有極個別基因位點不同的st,而不相關菌株的st至少有3個或3個以上基因位點不同。

mlst分析方法:mlst技術針對看家基因設計引物對其進行pcr擴增和測序,得出每個菌株各個位點的等位基因數值,然後進行等位基因圖譜(allelic profile)或序列型別(sequence types,sts)鑑定,再根據等位基因圖譜使用配對差異矩陣(matrix pair-wise differences)等方法構建系統樹圖進行聚類分析。

mlst分析方案設計要素:(1)選擇經過初步篩選的菌株;(2)選擇具有獨特特徵的基因位點;(3)設計用於基因擴增和序列測定的引物。

實際運用中,對於已有的成熟mlst方案的細菌,可直接從mlst資料庫(

)中獲取分型方案。mlst

根據contig組裝結果進行序列分型 要輸入屬別  屬別名稱可以輸入 mlst --list去查詢

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