mRNA基本概念

2021-09-09 04:32:07 字數 640 閱讀 9089

mrna是由dna的一條鏈轉錄而來的(可以是正鏈,也可以是反鏈),dna是由非編碼區和編碼區組成,編碼區也有其特殊的結構,主要有外顯子和內含子組成。

mrna的乙個重要性質就是可變剪下,也就是同乙個編碼區,可能會有不同的外顯子組合。

mrna的結構:5』端的帽子結構和3』端的polya尾巴。

polya和oligo(dt)是什麼?它在mrna純化和反轉錄中有什麼作用?

傳統mrna差異顯示技術(ddrt-pcr)是根據絕大多數真核細胞mrna3'端具有的多 聚腺苷酸尾(polya)結構,因此可用含oligo(dt)的寡聚核苷酸為引物將不同的mrna反轉錄成cdna。該方法的創始人liang p和pardee a根據poly a序列起點前2個鹼基除aa外只有12種可能性的特徵,設計合成了12種下游引物,稱3′-錨定引物,其通式為5'-t11mn;同時為擴增出polya 上游500bp以內所有可能性的mrna序列,在5′端又設計了20種10bp長的隨機引物。這樣構成的引物對進行pcr擴增能產生出20000條左右的 dna條帶,其中每一條都代表一種特定mrna種,這一數字大體涵蓋了在一定發育階段某種細胞型別中所表達的全部mrna。將差別表達條帶中的dna回 收,擴增至所需含量,進行southernblot或northernblot或直接測序,從而對差異條帶鑑定分析,以便最終獲得差異表達的目的基因。

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