一、rna的分離
從新鮮的或者是冷凍的細胞或組織樣本中分離rna，一般情況下，樣品會被dna汙染。因此，在製備文庫之前，會使用dna酶（降解dna）降解rna樣品中的dna汙染。
二、rna的質量檢查
（在後續分析的時候也有質控這一步，不過是從測序質量這個層面的質量）
在製備文庫之前，要在rna降解，純度和數量上對rna進行質量檢查。
三、文庫製備
由於dna相較於rna有更好的穩定性，所以在測序前，需要將rna轉化為cdna。
rna-seq常用的illumina平台的文庫製備流程：
（1）獲得1~10ug純的，完好，質量合格的總rna。
（2）將總rna退火到寡核苷酸單鏈，經過兩輪純化，去除非特異性結合的核醣體和其他rna。
（3）利用片段化試劑使純化的mrn**段化。
（4）給片段化的mrna加上引物。
（5）逆轉錄mrna，產生cdna。
（6）合成雙鏈cdna。
（7）純化cdna，去除可能的游離的核苷酸，酶，緩衝劑。
（8）cdna末端修復，並純化。
（9）將雙鏈cdna的3』端轉換成腺苷酸。
（10）將接頭連線到雙鏈cdna的兩端。【接頭就相當於是每個文庫的標記，也就是說這個樣本所提取到的rna是這個標籤，可用於後期合併測序的時候追溯樣本**】
（11）繼續純化，連線了接頭經過末端修復的ds cdna。
（12）使用pcr擴增來富集文庫，使用來自接頭的序列作為引物，擴增已經存在的序列。純化。文庫製備完成。
（13）對文庫進行驗證和質量控制。
RNA seq分析流程
高通量測序知識 fastqc使用，相對應的r包fastqcr，rqc fastp biostrings包計算gc含量，q20等 library biostrings filepath system.file extdata s 1 sequence.txt package biostrings qd...
RNA seq 基本分析流程
easoncheng 高通量測序技術，就是二代測序，已經成為現代生物學研究的乙個較為常規的實驗手段。這一技術的發展極大地推動了基因組學，表觀基因組學以及翻譯組學的研究。rna seq 通過測定穩定狀態下的rna樣品的序列來對rna樣品進行研究，從而避免了許多之前研究手段的不足，比如象基因晶元或者 p...
網上支付系統的結構與典型流程
網上支付系統的結構與典型流程 柯技 網上支付結構 網上支付系統是面向網路金融服務業務的總需求而搭建的，必須滿足以下幾個方面的市場需求 1 對金融資訊綜合服務的需求。2 網路銀行的綜合服務內容。主要內容包括網路營銷 電子商務服務 網上銀行服務等。3 要能夠成功地克服電子商務網上支付過程中的諸多關鍵問題...