基於Edman降解的蛋白質測序法的用途詳解

2021-10-03 17:50:58 字數 640 閱讀 1025

在過去的幾十年,蛋白質序列測定的目的已經發生改變。其最初目的是確定蛋白質的全部或部分序列,以便更好地了解其結構和功能。分子生物學的出現提供了另一種更快速的方法,即通過對相應基因的測序來實現。設計寡核苷酸探針(用於基因轉殖過程)和確認分離出的轉殖確實是相關的部分都需要部分蛋白質序列。隨著全基因組測序的發展,我們離獲知所有基因(也可以說是所有蛋白質)序列的不遠了。然而,就目前我們對基因序列的了解,並不能為我們提供有關蛋白質功能的重要資訊,例如分子間和分子內二硫化物鍵合模式、修飾或其他處理方式。

目前,edman降解法是蛋白質測序最常用的方法之一。近年來,在各種質譜方法的不斷補充和完善,edman降解法現在可用於鑑定蛋白質及其衍生物的質量,並能根據目標肽到單個氨基酸殘基的片段化模式確定肽的序列。通過該法,比對重組蛋白插入位點和表達順序是否正確,以此實現對蛋白表達產物的驗證。此外,edman降解蛋白質測序法還有很多其他用途,此處借鑑了百泰派克生物所概括的:

(1)驗證蛋白表達產物:重組蛋白插入位點和表達順序是否正確

(2)驗證細胞株建立和發酵過程中蛋白產物:驗證細胞株建立和發酵過程中蛋白產物n端甲硫氨酸和訊號肽是否正確處理;

(3)分析蛋白降解/酶切:對降解/酶切形成的新蛋白片段n端進行分析,確定斷裂/酶切位點;

(4)de-novo測序:對於蛋白資料庫中不存在的全新蛋白序列進行分析。

蛋白質降解技術中常用的蛋白酶(一)

蛋白質譜分析前通過蛋白質降解技術對樣品進行降解常用到的幾種蛋白酶及其裂解特性如下表 胰蛋白酶 胰蛋白酶是蛋白質譜分析中應用最廣泛的蛋白酶。胰蛋白酶主要從豬或牛胰腺中獲得,且易於純化。用甲苯磺醯基 l 氨基聯苯氯甲基酮 tcpk 對其進行改性,可以抑制糜蛋白酶的殘留。胰蛋白酶一般在賴氨酸和精氨酸殘基處...

蛋白質濃度與鹽脅迫的關係 蛋白質的分離純化(二)

從原料中抽提得到的蛋白質溶液一般蛋白質含量較低,並含有多種雜質。對抽提液進行初步提取,也稱粗提或粗分級,主要目的是除去糖 脂類 核酸及大部分雜蛋白,並將蛋白濃縮。這一步的操作一般應該盡量簡單快速,並且適於處理大量樣品,所以以沉澱法為主,包括簡單沉澱 分級沉澱等。簡單沉澱是一次性完成,分級沉澱是分次加...

基於Pubmed資料庫的蛋白質修飾後的資訊挖掘

摘 要 如今pubmed文獻檢索系統上發表的醫學文獻的數量十分龐大,且數量逐年增加,研究人員如果想人工地去檢視找出pubmed文獻裡面的知識是絕對不可能,因此,人們轉而利用計算機去獲取文獻裡面的知識。本篇 介紹了如何借用文字挖掘技術去挖掘出pubmed文獻裡面的知識,並且結合了目前文字挖掘技術,講述...