dna提取
奈米孔可以測序dna本身長度的讀長，這就需要原始dna具有的長度。因此，在測序之前能夠提取到相對完整的dna比較重要。由於不同物種dna提取方法不同，這就需要依據一些不同樣本提取的經驗方法。例如植物基因組具有細胞壁，而且由於次級代謝物如多醣和多酚含量很高，很難從植物細胞中獲得純淨、優質的高分子量（hmw）dna。這種汙染物的存在會對下游分析應用產生很大影響，也是測序產出低的最常見原因之一。nanopore社群提供了乙個不同物種提取的經驗方法交流社群，可以在裡面找到適合自己樣品提取的方法。
提取出來的dna對濃度和質量的要求與其他分子生物學實驗的要求差不多，盡量保證更長的片段，不要有rna或者蛋白質的汙染。
1、如何評估dna質量？
可以使用nanodrop儀器進行檢驗。
dna ：a260/a280 = ~1.8 ，a260/a230=~2.0-2.2
rna : a260/a280 = ~2.0 ，a260/a230=~2.0-2.2
2、評估片段大小：
使用agilent bioanalyzer/tapestation，pfge，fragment analyzer，femto pulse:
nanopore建庫
傳統的二代測序，以illumina測序為例，一般需要經過隨機打斷，加a鹼基，加測序引物，加index或者barcode，加adapter，擴增等過程。因為nanopore測序讓dna分子穿過奈米孔，通過讀取電訊號來識別鹼基，因此建庫不需要繁瑣過程，這樣不僅可以提高建庫的速度，也能減少引入的誤差，一般來說操作步奏越少，自然引入的誤差也就更少。nanopore建庫主要是需要給待測dna兩側先加上a鹼基，使平末端變成粘性末端，然後再加上y接頭以及馬達蛋白。
是否需要pcr
二代邊合成邊測序的方案中，需要大量使用的pcr操作，包括前期加接頭，cluster等步驟，都需要大量的pcr，由於pcr的長度限制，也就導致了為什麼sanger測序與illumina測序不能進行長讀長的測序，例如超過1000bp讀長。而nanopore測序過程中可以完全無需pcr，因此可以測序超長讀長，而且pcr也會帶來一些擴增的偏向性，給資料引入一些誤差。
不過根據不同的研究目的，有些過程也是需要使用pcr的，例如原始dna量太少，就需要進行擴增，或者像轉錄本本身長度不是特別長，需要反轉錄成cdna，可以進行prc。又或者對16s進行測序，無需太多資料量，這種情況下就需要進行混樣建庫，這還是需要使用到pcr，目前nanopore也支援混樣建庫，最多支援96個樣品。可以根據不同的研究目的選擇合適的建庫方法。
自動化建庫裝置voltrax
目前，nanopore發布了voltrax，一種可實現快速樣品製備的小型自動化裝置，voltrax可以進行自動化的文庫製備，用乙個小型裝置取代了一系列實驗室裝置。
單細胞測序技術及應用進展
發表於 基因組學與應用生物學，2015 年，第34 卷，第5 期，第902 908 頁 本文講了什麼？細胞是生命的單位，然而大多數的人類基因組 癌症或其它研究仍然是通過從多個細胞中抽提dna 來進行測序，這忽略了細胞間的差異對於控制基因表達 細胞行為的影響，實驗結果往往表示的是細胞群體中訊號表達的均...
四代 DNA 測序技術簡述
四代 dna 測序技術簡述 姚亭秀 北京市第八十中學 北京 100102 摘要 dna 測序技術是現代分子生物學研究中最常用的技術，極大推動了生物學的發展。從 20世紀 70 年代至今，dna 測序技術已歷經4代。簡介被稱為 dna 測序始祖的第 1 代 測序技術 邊合成邊測序的第 2 代測序技術 ...
第二代DNA測序技術
dna測序 dna sequencing 作為一種重要的實驗技術，在生物學研究中有著廣泛的應用。早在dna雙螺旋結構 watson and crick,1953 被發現後不久就有人報道過dna測序技術，但是當時的操作流程複雜，沒能形成規模。隨後在1977年sanger發明了具有里程碑意義的末端終止測...